服務(wù)熱線
15201163601
-
toxin實(shí)驗(yàn)報(bào)告與結(jié)果
發(fā)布時(shí)間： 2023-03-23 點(diǎn)擊次數(shù)： 904次北京華新康信現(xiàn)貨 大力回饋新老客戶(hù)，現(xiàn)貨打折出售，現(xiàn)有品牌和種類(lèi)，新老客戶(hù)可以自由選購(gòu)：Toxin北京試劑toxin常見(jiàn)問(wèn)題與解答 Toxin上海試劑toxin試劑 toxin廣東試劑toxin深圳試劑toxin河北試劑toxin上海試劑toxin北京試劑 toxin安徽試劑 toxin河南試劑
Toxin代理，toxin上海試劑toxin廣東試劑toxin廣州試劑toxin深圳試劑toxin內(nèi)蒙古試劑toxin河南試劑toxin江蘇試劑toxin江西試劑toxin湖北試劑toxin湖南試劑toxin安徽試劑toxin蘇州試劑toxin杭州試劑toxin浙江試劑toxin南昌試劑toxin北京試劑toxin天津試劑toxin遼寧試劑toxin寧夏試劑toxin深圳試劑 TOXIN 制劑存儲(chǔ) Toxin天津試劑 Toxin天津試劑 Toxin江蘇試劑 Toxin江蘇試劑
vmrd獸醫(yī)診斷試劑盒的介紹 vmrd獸醫(yī)診斷試劑盒的介紹
vmrd試劑盒-動(dòng)物測(cè)試報(bào)告 vmrd試劑盒-動(dòng)物測(cè)試報(bào)告 moltox瀝青微煙實(shí)驗(yàn) moltox瀝青微煙實(shí)驗(yàn)
因此，我們重點(diǎn)研究了 AT101誘導(dǎo)的 BNIP3在 MPNST 細(xì)胞中的功能作用。為了確定 BNIP3是否促進(jìn) AT101誘導(dǎo)的 MPNST 細(xì)胞死亡，我們通過(guò)用 BNIP3siRNA 或?qū)φ辗前邢?span> siRNA 轉(zhuǎn)染 T265-2c 細(xì)胞來(lái)瞬時(shí)敲低 BNIP3表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn) BNIP3，而不是對(duì)照，siRNA 有效地減弱 BNIP3的表達(dá)(圖3D)。然后，我們用10或15μMAT101處理 T265-2c 細(xì)胞，并比較 BNIP3siRNA 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的細(xì)胞活力與用對(duì)照寡核苷酸轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的細(xì)胞活力。我們發(fā)現(xiàn)，與用非靶向 siRNA 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，在 BNIP3敲低的細(xì)胞中，AT101誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡顯著減弱(圖3E)。我們得出結(jié)論，BNIP3是 AT101誘導(dǎo)的 MPNST 細(xì)胞毒性的重要介質(zhì)。 AT101引起 HIF-1α 蛋白的積累，其調(diào)節(jié) BNIP3表達(dá) BNIP3是 HIF-1α 的直接轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)，已顯示調(diào)節(jié) BNIP3表達(dá)以響應(yīng)缺氧[40]和神經(jīng)酰胺處理的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞[41]。HIF-1α 可以在缺氧條件下和其他非缺氧刺激后積累[42]。AT101或棉酚處理對(duì) HIF-1α 蛋白水平的積累尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，我們檢測(cè)了 AT101處理的 MPNST 細(xì)胞中 HIF-1α 的蛋白水平。我們發(fā)現(xiàn) AT101處理增加了 T265-2c 細(xì)胞中 HIF-1α 蛋白的水平(圖4A) ，而沒(méi)有伴隨的 HIF-1α mRNA 的增加(圖4B)。我們還發(fā)現(xiàn)，在 AT101處理后，HIF-1α 蛋白在細(xì)胞核內(nèi)積累(圖4C) ，在那里它被證明具有轉(zhuǎn)錄因子的功能。來(lái)確定是否
BNIP3是 HIF-1α 的直接轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)，已顯示其調(diào)節(jié)缺氧反應(yīng)中的 BNIP3表達(dá)[40]和用神經(jīng)酰胺處理的膠質(zhì)瘤細(xì)胞[41]。HIF-1α 可以在缺氧條件下和其他非缺氧刺激后積累[42]。AT101或棉酚處理對(duì) HIF-1α 蛋白水平的積累尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，我們檢測(cè)了 AT101處理的 MPNST 細(xì)胞中 HIF-1α 的蛋白水平。我們發(fā)現(xiàn) AT101處理增加了 T265-2c 細(xì)胞中 HIF-1α 蛋白的水平(圖4A) ，而沒(méi)有伴隨的 HIF-1α mRNA 的增加(圖4B)。我們還發(fā)現(xiàn)，在 AT101處理后，HIF-1α 蛋白在細(xì)胞核內(nèi)積累(圖4C) ，在那里它被證明具有轉(zhuǎn)錄因子的功能。為了確定 HIF-1α 是否轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié) BNIP3表達(dá)，我們瞬時(shí)敲低了 T265-2c 細(xì)胞中的 HIF-1α 表達(dá)(圖4D) ，并檢查了 AT101處理后對(duì) BNIP3表達(dá)的影響。我們發(fā)現(xiàn) HIF-1αsiRNA 而不是對(duì)照 siRNA 抑制 AT101處理的細(xì)胞中 BNIP3的表達(dá)(圖4E)。我們的結(jié)論是，AT101導(dǎo)致 HIF-1α 蛋白在 MPNST 細(xì)胞中的積累，從而促進(jìn) BNIP3的表達(dá)。
圖4。AT101通過(guò) HIF-1α 積累刺激 BNIP3表達(dá)。用 AT101處理的 T265-2c 細(xì)胞(10μM，24小時(shí))表現(xiàn)出 HIF-1α 蛋白水平增加(A) ，但是 AT101處理的 MPNST 細(xì)胞相對(duì)于未處理的細(xì)胞不顯示 HIF-1αmRNA 水平(B)的顯著變化。AT101導(dǎo)致 T265-2c 細(xì)胞核部分 HIF-1α 蛋白水平升高(C)。相對(duì)于用非靶 siRNA 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，用 AT101處理后，用 HIF-1αsiRNA 轉(zhuǎn)染的 T265-2c 細(xì)胞顯示 HIF-1α 蛋白(D)和 BNIP3蛋白表達(dá)(E)的水平降低。# = 不重要。
AT101通過(guò)細(xì)胞內(nèi)鐵螯合作用引起 HIF-1α 的積累除了缺氧之外，某些非缺氧刺激如雌激素、胰島素和表皮生長(zhǎng)因子[43]-[45]可以在常氧條件下誘導(dǎo) HIF-1α 的表達(dá)。有趣的是，槲皮素和高良姜素等多酚也可以誘導(dǎo) HIF-1α 蛋白的積累，而不增加 HIF1-α mRNA 水平[46] ，正如我們?cè)?span> AT101中觀察到的。這種作用被認(rèn)為是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)鐵螯合作用介導(dǎo)的[46] ，[47]。因此，我們接下來(lái)詢(xún)問(wèn)鐵是否參與 AT101誘導(dǎo)的 HIF-1α 積累，BNIP3表達(dá)和 MPNST 細(xì)胞死亡。為了解決 AT101是否干擾細(xì)胞內(nèi)鐵水平，我們?cè)u(píng)估了用 AT101處理的 MPNST 細(xì)胞中運(yùn)鐵蛋白受器1(TfR1)和鐵蛋白(重鏈)的蛋白質(zhì)水平。TfR1是一種載體蛋白，促進(jìn)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞[48]。TfR1的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄后受到調(diào)控，并與細(xì)胞內(nèi)鐵濃度呈負(fù)相關(guān)。此外，鐵蛋白重鏈催化細(xì)胞內(nèi)鐵儲(chǔ)存的第一步，其蛋白質(zhì)水平對(duì)應(yīng)于細(xì)胞內(nèi)鐵水平[48]。我們發(fā)現(xiàn) AT101處理增加了 T265-2c 和90-8細(xì)胞中的 TfR1蛋白水平并降低了鐵蛋白重鏈蛋白水平，并且當(dāng)培養(yǎng)基補(bǔ)充檸檬酸鐵(100μM)作為鐵離子的來(lái)源時(shí)，這些 AT101效應(yīng)被阻斷(圖5A)。為了確定鐵螯合是否是 AT101誘導(dǎo) HIF-1α 積累以及隨后的 BNIP3和自噬的機(jī)制，我們?cè)u(píng)估了補(bǔ)鐵對(duì)這些事件的影響。在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入檸檬酸鐵消除了由 AT101誘導(dǎo)的 HIF-1α，BNIP3和 LC3II 的積累(圖5B)。為了進(jìn)一步評(píng)估補(bǔ)鐵對(duì) AT101誘導(dǎo)的 MPNST 細(xì)胞毒性的功能相關(guān)性，我們?cè)u(píng)估了添加檸檬酸鐵后的細(xì)胞活力。
我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)基的鐵補(bǔ)充對(duì) T265-2c 和90-8細(xì)胞中 AT101誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性提供了顯著的保護(hù)(圖5C，D)。AT101對(duì) MPNST 細(xì)胞的這些作用與 DFO (一種著名的鐵螯合劑)的作用相似。向細(xì)胞培養(yǎng)基中添加檸檬酸鐵不能影響 ABT737的細(xì)胞毒作用，ABT737是 T265-2c 和90-8細(xì)胞上結(jié)構(gòu)上不同的 BH3模擬物(圖5E，F)。
圖5。補(bǔ)鐵保護(hù) MPNST 細(xì)胞免受 AT101誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。 AT101(15μM，24小時(shí))處理增加了 MPNST 細(xì)胞中的運(yùn)鐵蛋白受器1(TfR1)蛋白水平并降低了鐵蛋白水平(A) ，這通過(guò)向培養(yǎng)基中加入檸檬酸鐵逆轉(zhuǎn)。補(bǔ)充檸檬酸鐵(100μM)的培養(yǎng)基也消除了在 T265-2c 和90-8細(xì)胞(C，D)中 AT101誘導(dǎo)的 HIF-1α，BNIP3和 LC3II 蛋白表達(dá)(B)和細(xì)胞毒性。通過(guò)用檸檬酸鐵(100μM)(E，F)補(bǔ)充培養(yǎng)基，MPNST 細(xì)胞不能從 ABT737(15μM)誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性中拯救。DFO (50μM，24小時(shí))作為鐵螯合陽(yáng)性對(duì)照。* p-value < 0.05.# = 不重要。
討論 AT101是棉酚的修飾對(duì)映體，一種天然存在的抗凋亡 BCL-2蛋白的小分子拮抗劑[49] ，[50]。AT101及其母體化合物棉酚已被證明在廣泛的癌細(xì)胞中具有細(xì)胞毒性作用，AT101目前正在進(jìn)行幾種癌癥的 II 期臨床試驗(yàn)[51]-[54]。除了通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助分子建模，核磁共振成像和熒光偏振測(cè)定被鑒定為 BH3模擬物外，其他研究已經(jīng)證明棉酚可以抑制 DNA 合成[19] ，細(xì)胞能量代謝[55] ，蛋白激酶C [21] ，端粒酶[57]和人類(lèi)有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白，EG5[58]。除了這些作用之外，棉酚還可以調(diào)節(jié)鈣穩(wěn)態(tài)[20]和 TGF-β1信號(hào)傳導(dǎo)[59]。在結(jié)構(gòu)研究表明棉酚是一種 BH3模擬物后，發(fā)現(xiàn)棉酚可以通過(guò)增加活性氧類(lèi)，激活 p53[61]和抑制 NF-κB 活性來(lái)激活內(nèi)在的凋亡途徑[62]。此外，棉酚可以增加促凋亡 BH3-only 蛋白的表達(dá)[23] ，并誘導(dǎo) BCL-2中的構(gòu)象改變，使其促凋亡[63]。由于棉酚細(xì)胞毒作用的機(jī)制可能受到癌細(xì)胞和其他腫瘤特異性因素的遺傳特征的影響，鑒定 AT101細(xì)胞毒作用的相關(guān)機(jī)制對(duì)于評(píng)估其在 MPNST 治療中的潛在用途是重要的。
toxin
toxin上海試劑
toxin廣東試劑
toxin深圳試劑
toxin北京試劑
toxin天津試劑
toxin安徽試劑
toxin遼寧試劑
toxin河北試劑
toxin
toxin江蘇試劑
toxin浙江試劑
toxin河南試劑
toxin上海試劑
toxin寧夏試劑
toxin山東試劑
toxin遼寧試劑
toxin河北試劑
toxin
toxin四川試劑
toxin湖北試劑
toxin湖南試劑
toxin福建試劑
toxin重慶試劑
toxin陜西試劑
toxin山西試劑
toxin北京試劑
toxin
toxin內(nèi)蒙古試劑
toxin廣西試劑
toxin貴州試劑
toxin云南試劑
toxin江西試劑
toxin湖南試劑
toxin黑龍江試劑
toxin甘肅試劑